Legionella Agar Base
Основа агара для выделения легионелл
M809A

 

Эту среду со специальными добавками используют для культивирования легионелл.

Состав**:

Ингредиенты
грамм/литр
Уголь активированный
2,00
Дрожжевой экстракт
10,00
Агар-агар
13,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,9 ± 0,2
 

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 12,5 г порошка в 450 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15мин. Остудить до 50°С и асептично добавить растворенное содержимое 1 пузырька с ростовой добавкой для легионелл (FD142). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри. Во время розлива среду надо перемешивать, равномерно распределяя частицы угля. При необходимости приготовления селективной среды, наряду с ростовой добавкой (FD142) в 450 мл расплавленной и остуженной основы вносят содержимое 1 флакончика с селективной добавкой BMPA (FD144) или добавкой GVPA (FD160).

Принцип и оценка результата:

Эту среду вначале называли агаром F-G. Ее модифицировали Feely и соавт. (1), заменив крахмал на активированный уголь и гидролизат казеина на дрожжевой экстракт, что способствовало улучшению выделения Legionella pneumophila (2). Pasculle и соавт. (3) сообщил, что добавление буфера ACES (N-2-ацетамидо-2-аминоэтан сульфокислота) повышает питательную ценность среды. Edelstein (4) для повышения чувствительности среды предложил добавить в ее состав a-кетоглютарат.

Среда содержит дрожжевой экстракт, который служит источником необходимых для роста легионелл азотистых питательных веществ. a-Кетоглютарат удовлетворяет специфические питательные потребности легионелл. Активированный уголь нейтрализует токсические вещества, образующиеся в процессе роста бактерий или стерилизации среды. ACES придает буферные свойства среде, препятствуя резким сдвигам рН и удерживая его значения в зоне оптимума для легионелл. Антибиотики, входящие в состав добавки, подавляют рост разнообразных контаминирующих бактерий и грибов.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий серый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,3 %-му агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет черную окраску, непрозрачна, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25 °С водный раствор (2,5% вес/об) имеет рН 6,9 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов на среде с добавкой FD142 через 48-72 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Рост
Цвет колоний
Legionella pneumophila (33153)
Хороший
или обильный
Светло-голубые
или серо-белые
Legionella dumoffii (33343)
Хороший
или обильный
Светло-голубые
или серо-белые

Ссылки:

1. Feely J. C., et al, 1978, J. Clin. Microbiol., 8(3):320.
2. Feely, Gibson, Gorman, et al, 1979, J. Clin. Microbiol., 10(4):437.
3. Pasculle, Feely, Gibson et al, 1980, J. Infect. Dis., 141:727.
4. Edelstein, 1981, J. Clin. Microbiol., 14:298.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.