Buffered Charcoal Yeast Extract Agar Base
Основа селективного агара для легионелл
M813
Modified Buffered Charcoal Agar Base
Основа селективного агара для легионелл модифицированная
M892

 

Эта среда после внесения соответствующих добавок используется для выделения и культивирования видов Legionella.

Состав**:

Ингредиенты
M813
грамм/литр
M892
грамм/литр
Протеозопептон
10,00
Дрожжевой экстракт
10,00
Уголь активированный
2,00
2,00
Буфер ACES
10,00
10,00
Калия a-кетоглютарат
1,00
1,00
Агар-агар
17,00
17,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,9 ± 0,2
 
 

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 20,0 г порошка в 500 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С, асептично добавить растворенные в стерильной воде специальные добавки для легионелл (FD041 и FD040). Тщательно перемешать и при постоянном помешивании разлить в стерильные чашки Петри, следя за тем, чтобы частицы угля распределялись равномерно. При необходимости повысить селективность в расплавленную среду можно внести также селективные добавки для легионелл (FD017, FD183R, FD038).

Принцип и оценка результата:

Первоначально Feeley и соавт. (1) разработали агар FD, который затем был модифицирован Edelstein (2) для селективного культивирования и оптимизации роста легионелл, нуждающихся в специальных средах. Легионеллы не растут на кровяном агаре с бараньей кровью и не утилизируют (окислением или ферментацией) углеводы на общепринятых средах. В качестве основного источника энергии они используют аминокислоты, а один вид имеет абсолютную потребность в L-цистеине. Эта аминокислота, как и пирофосфат железа, способствуют росту легионелл. В качестве детоксиканта среда содержит активированный уголь. Дрожжевой экстракт является богатым источником витаминов, азота и углерода. Буфер ACES обеспечивает поддержание оптимальных значений рН. Цистеин, пирофосфат железа и кетоглютарат стимулируют рост легионелл. Для подавления роста сопутствующих микроорганизмов и придания селективных свойств среде в нее можно вносить антибиотики. Обычно для этой цели применяют следующие добавки: Legionella Selective Supplement II (CCVC), содержащую цефалотин, колистин, ванкомицин и циклогексимид (3) или Legionella Selective Supplement IV (MWY), содержащую глицин, полимиксин В, анизомицин, ванкомицин, бромтимоловый синий и бромкрезоловый пурпурный (4).

Следует отметить, что работа с культурами легионелл должна проводиться в защитных масках, перчатках, с использованием ламинарного бокса и другими предосторожностями.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий черный порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет серо-черную окраску, опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М813 или М892 (4,0% вес/об) имеют рН 6,9 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 3-4 дня при 35°С в атмосфере 90%-ной влажности.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Рост*
Цвет колоний
Legionella pneumophila (33153)
Обильный
Бело- или голубовато-серые
Legionella dumoffii (33343)
Обильный
Слегка голубовато-серые
Escherichia coli (25922)
Слабый
или отсутствует
Staphylococcus epidermidis (12228)
Слабый
или отсутствует

Примечание: * в присутствии селективной добавки с антибиотиками

Ссылки:

1. Feeley J.C., Gibson R.J., Gorman G.W. et al, 1979, J. Clin. Microbiol., 10:437.
2. Edelstein P.H., 1981, J. Clin. Microbiol., 14:298.
3. Bopp C.A., Sumner J.W., Morris G.K. and Wells J.G., 1981, J. Clin. Microbiol., 13:714.
4. Vicker R., Brown and Garrity, 1981, J. Clin. Microbiol., 13:380.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.