Differential Buffered Charcoal Yeast Extract Agar
Забуференный угольно-дрожжевой агар для легионелл
M814

 

Эта среда используется для селективного выделения и дифференциации видов Legionella.

Состав**:

Ингредиенты
грамм/литр
Дрожжевой экстракт
10,00
Уголь активированный
1,50
L-цистеина гидрохлорид
0,40
Железа пирофосфат растворимый
0,25
Буфер ACES
10,00
a-Кетоглютарат
0,20
Бромкрезоловый пурпурный
0,01
Бромтимоловый синий
0,01
Агар-агар
15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 6,9 ± 0,2
 

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 37,37 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. При необходимости в стерильную среду можно добавить полимиксин В (50 ЕД/мл) и ванкомицин (1 мг/мл). Разлить готовую среду в чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Первоначально Feeley и соавт. (1) разработали агар FD, который затем был модифицирован Feeley и соавт. (2) для селективного культивирования и дифференциации легионелл. В модифицированной среде крахмал и гидролизат казеина заменены на активированный уголь и дрожжевой экстракт, соответственно, что способствует выделению Legionella pneumophila. Буфер ACES обеспечивает поддержание оптимальных значений рН (3).

Эта среда содержит дрожжевой экстракт, который обеспечивает ее питательными веществами. Пирофосфат железа, L-цистеина гидрохлорид и a-кетоглютарат стимулируют рост легионелл (4). Образующиеся в процессе роста токсические вещества нейтрализуются активированным углем, который изменяет поверхностное натяжение среды.

Бромкрезоловый пурпурный и бромтимоловый синий служат индикаторами рН в среде (5). Полимиксин В подавляет рост большинства грамотрицательных бактерий, а ванкомицин – грамположительных.

Следует отметить, что работа с культурами легионелл должна проводиться в защитных масках, перчатках, с использованием ламинарного бокса и другими предосторожностями. Рабочие поверхности необходимо очищать с применением 5%-ного раствора гипохлорита. Перед очисткой или сбрасыванием все материалы надо подвергать автоклавированию.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий черный порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет серо-черную окраску, опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,74% вес/об) имеют рН 6,9 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 72-96 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Рост*
Цвет колоний
Legionella pneumophila (33153)
Обильный
Бело- или голубовато-серые
Legionella dumoffii (33343)
Обильный
Голубовато-серые

Ссылки:

1. Feeley, et al, 1978, J. Clin. Microbiol., 8:320.
2. Feeley, Gibson, Gorman, et al, 1979, J. Clin. Microbiol., 10:437.
3. Pasculle, Feeley, Gibson, et al, 1980, J. Infect. Dis., 141:727.
4. Edelstein, 1981, J. Clin. Microbiol., 14:298.
5. Vickers, Brown and Garrity, 1981, J. Clin. Microbiol., 13:380.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.