Clostridium Difficile Agar Base Основа селективного агара для Clostridium difficile

М836

 

Среду со специальной добавкой используют для селективного выделения Clostridium difficile из пищевых продуктов и некоторого патологического материала.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Протеозопептон	40,00
Натрия гидрофосфат	5,00
Калия дигидрофосфат	1,00
Магния сульфат	0,10
Натрия хлорид	2,00
Фруктоза	6,00
Агар-агар	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 34,55 г порошка в 500 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до 50°С и асептично добавить: восстановленное в воде содержимое 1 пузырька с селективной добавкой для Clostridium difficile (FD010) и стерильную дефибринированную кровь лошади или барана (до 7% об/об). Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Принцип и оценка результата:

Эта среда приводится в прописи George и соавт. (1). В качестве причины заболевания человека Clostridium difficile впервые были описаны Smith и King (2).

Селективные компоненты этой среды (циклосерин и цефокситин) подавляют рост большинства бактерий, обильно представленных в кишечном содержимом: энтеробактерий, энтерококков, стафилококков, грамотрицательных анаэробных бактерий и клостридий, не относимых к виду Clostridium difficile. Добавление лошадиной крови (до 7% об/об) способствует увеличению размеров колоний Clostridium difficile и их выделению. Материал засевают штрихами для получения роста изолированных колоний. Засеянные чашки инкубируют 18-48 ч при 37°С. Clostridium difficile образуют серовато-белые колонии неправильной формы, выпуклые непрозрачные, размером 4-6 мм в диаметре через 48 ч. Ввиду присутствия антибиотиков эти микроорганизмы не имеют типичного окрашивания по методу Грама. Поскольку предполагается внесение крови в среду, она не содержит индикатор нейтральный красный (1). Рекомендуется проводить и другие тесты для определения возбудителя (выявление специфического токсина) и оценивать клинические данные. Для получения типичных морфологических характеристик рекомендуется сделать пересев на кровяной агар (М073).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Основа среды имеет светло-янтарную окраску. При добавлении дефибринированной крови лошади или барана (до 7% об/об). среда становится вишнево-красной и опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (6,91% вес/об) имеет рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 48 ч при 35-37°С в анаэробных условиях.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост*	Цвет колоний
Clostridium difficile (11204)	Хороший или обильный	Серовато-белый
Escherichia coli (25922)	Подавляется	–
Shigella flexneri (12022)	Подавляется	–
Staphylococcus aureus (25923)	Подавляется	–

Примечание: * - при внесении селективной добавки

Ссылки:

1. George W.L., Sutter V.L., Citron D. and Finegold S.M., 1976, J.Clin. Microbiol., 9:214.
2. Smith L.D.S. and King E.O., 1962, J.Bact., 84:65.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С не более 5 суток.