Lysine Iron Cystine Broth
Лизин-цистиновый железосодержащий бульон |
M845
|
Эту среду используют для быстрого предварительного определения сальмонелл в пищевых продуктах, их ингредиентах и кормах.
Ингредиенты
|
грамм/литр
|
Гидролизат казеина
|
5,00
|
Дрожжевой экстракт
|
3,00
|
L-Лизина гидрохлорид
|
10,00
|
Маннит
|
5,00
|
Глюкоза
|
1,00
|
Салицин
|
1,00
|
L-Цистин
|
0,10
|
Железа аммонийного цитрат
|
0,50
|
Натрия тиосульфат
|
0,10
|
Нейтральный красный
|
0,025
|
Конечное значение рН (при 25°С) 6,2 ± 0,2
|
|
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Размешать 25,7 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до комнатной температуры и асептично добавить разведенное в воде содержимое 1 пузырька с селективной (новобиоцин) добавкой (FD101). Тщательно перемешать и разлить в стерильные пробирки.
Эта среда является модификацией прописи, предложенной Hober, Aston и Peterson (1), которые показали полезность такой среды для определения в течение 3 дней сальмонелл в пищевых продуктах и их ингредиентах.
Гидролизат казеина и L-Цистин служат источником необходимых питательных веществ для роста бактерий, а дрожжевой экстракт – источником витаминов группы В. Глюкоза, маннит и салицин являются ферментируемыми субстратами. Цитрат аммонийного железа и тиосульфат натрия являются индикатором образования сероводорода. Лизин служит субстратом для декарбоксилирования или дезаминирования.
Навеску исследуемого материала (25 г) вносят в Лактозный бульон (М026), размешивают и инкубируют при 35±2°С в течение 24 ч, затем 1 мл культуры вносят в 10 мл Тетратионатного бульона (М032) и инкубируют при той же температуре 24 ч. Вторичную культуру в объеме 1 мл засевают в 10 мл Лизин-цистинового железосодержащего бульона с новобиоцином и инкубируют при указанной температуре 24 ч. Для исключения ложноотрицательного результата в случае сероводородотрицательных сальмонелл пробирки дополнительно инкубируют в течение 16-24 ч. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,1 мл 0,3%-ного раствора бромтимолового синего в 0,1N растворе гидроксида натрия и 50%-ном этаноле. Если цвет среды меняется с желтого на темно-зеленый или синий, это указывает на щелочную реакцию и, следовательно, присутствие сальмонелл.
Гомогенный сыпучий светло-розовый порошок.
Среда имеет красноватую окраску, прозрачна, может иметь небольшие частицы.
При 25°С водный раствор (2,57% вес/об) имеет рН 6,2 ± 0,2.
Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35°С.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
|
Рост
|
Цвет среды
|
Цвет после внесения индикатора
|
Н2S
|
Salmonella typhi (19430)
|
Обильный
|
Желтый
|
Темно-зеленый или синий
|
+
|
Salmonella enteritidis (13076)
|
Обильный
|
Желтый
|
Темно-зеленый или синий
|
+
|
Escherichia coli (25922)
|
Подавляется
|
Красный
|
Красный или синий
|
–
|
Shigella flexneri (12022)
|
Подавляется
|
Красный
|
Красный или синий
|
–
|
1. Hoben, Ashton and Peterson, 1973, Applied Microbiol., 25:123.
Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.