М-Broth М-бульон

M846

 

Эту среду используют для определения сальмонелл в пищевых продуктах и кормах путем ускоренного обогащения с последующим серотипированием.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Гидролизат казеина	12,50
Дрожжевой экстракт	5,00
D-Манноза	2,00
Натрия хлорид	5,00
Натрия цитрат	5,00
Калия гидрофосфат	5,00
Марганца хлорид	0,14
Магния сульфат	0,80
Железа сульфат	0,04
Твин-80	0,75
Конечное значение рН (при 25°С) 7,0 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 36,23 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин.

Принцип и оценка результата:

Эта среда разработана Sperber и Diebel (1) для ускоренного обнаружения сальмонелл. На все исследование тратится 50 ч, из которых 18 ч – на предварительное обогащение, 24 ч – на селективное обогащение и 6-8 ч – на элективное обогащение, а также 2 ч на серологическое исследование. Для исключения неспецифической агглютинации авторы на этапе элективного обогащения модифицировали Бульон АРТ, заменив в его составе глюкозу на маннозу. Авторами (2) показано, что с применением метода обогащения и серологического подтверждения быстрее и проще можно выявить сальмонеллы, по сравнению с другими методами (3) при сохранении точности и чувствительности.

Гидролизат казеина и дрожжевой экстракт служат источником необходимых питательных веществ, витаминов и микроэлементов для роста сальмонелл.

Манноза является ферментируемым субстратом и источником энергии, а также препятствует спонтанной агглютинации за счет фимбрий (1). Соли стимулируют бактериальный рост, а твин-80 служит источником жирных кислот.

Готовят 10%-ную суспензию исследуемого материала в стерильном Лактозном бульоне (М026) и инкубируют при 35±2°С в течение 18-24 ч, затем 1 мл первично обогащенной культуры вносят в 9 мл Цистин-селенитового бульона (М025А) или Тетратионатного бульона (М032) и инкубируют при той же температуре 24 ч. Вторичную культуру засевают в М-Бульон и инкубируют при указанной температуре 2 ч, после чего проводят тест Н-агглютинации.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет янтарную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, может иметь легкий преципитат.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,62% вес/об) имеет рН 7,0 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 6-8 ч при 35-37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост
Salmonella choleraesuis (12011)	Обильный
Salmonella enteritidis (13076)	Обильный
Salmonella paratyphi A	Обильный
Salmonella paratyphi B	Обильный
Salmonella typhi (6539)	Обильный
Salmonella typhimurium (14028)	Обильный

Ссылки:

1. Sperber and Deibel, 1969, Appl. Microbiol., 17:533.
2. Fantasia, Sperber and Deibel, 1969, Ibid, 17:540.
3. Bacteriological Analytical Manual, 1969, FDA, Washington, D.C.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.