HiMedia: инструкция по применению продукции По всем вопросам обращаться: Почтовый адрес: 124498, Москва, а/я 130. Офис: 123007, Москва, Хорошевское шоссе, д. 13 а, кор.3. Тел/Факс: +7 (495) 940 33 12, 940 33 13, 940 33 14,940 33 96, 940 33 97, 940 33 98. E-mail: himedia@himedialabs.ru Наш сайт: www.himedialabs.ru
Diphteria Virulence Agar Base Основа агара для определения токсигенности дифтерийных микроорганизмов Продукция зарегистрирована в Министерстве здравоохранения Российской Федерации (ФСЗ 2009/03709).		Кат. № M882

Применение:

С питательной и селективной добавками используется для определения токсигенности Corynebacterium diphtheriae.

Состав**:

ингредиенты	г/л
Протеозный пептон	20.00
Натрия хлорид	2.50
Агар	15.00
Конечное значение рН при 25оС	7.8±0.2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимых параметров.

Приготовление:

Суспендируйте 37,5 г порошка в 1 000 мл дистиллированной воды. Нагрейте до кипения для растворения компонентов среды полностью. Стерилизуйте автоклавированием при 1,1атм. (121°C) в течение 15 минут. Охладите до 55-60°C. Асептически внесите 2 мл добавки KL Virulence Enrichment (FD072) и 0,5 мл стерильного 1%-го теллурита калия (FD052) в 100 мм чашку Петри и затем быстро добавьте 10 мл стерильной Основы Агара для определения вирулентности Corynebacterium diphtheriae. Прежде чем питательная среда затвердеет, поместите полосу фильтровальной бумаги, насыщенную дифтерийным антитоксином по диаметру чашки. Позвольте полоске погрузиться ко дну чашки. Засейте чашку обильным инокулятом поперек полоски.

Принцип и оценка результата:

Corynebacterium diptheriae - принципиально важный инфекционный агент человека, патогенность которого обусловлена продуцированием мощного экзотоксина, активно воздействующего на множество тканей, включая сердечную мышцу и периферические нервы (1). Токсин, диффундирующий от предполагаемой культуры Corynebacterium diphtheriae, посеяной штрихом, визуализируется формированием белой линии преципитата, в том месте, где токсин встречается с антитоксином дифтерии, диффундирующим от полоски фильтровальной бумаги, залитой в агар. Токсигенность In vitro (вирулентность) Corynebacterium diphtheriae была впервые описана Elek (2). Метод Eleks был далее улучшен King, Frobisher и Parsons (3) при помощи стандартизированной питательной среды.Эта питательная среда дала результаты, сопоставимые с инокуляционной пробой на животных.

Также было найдено, что протеозный пептон поддерживает токсинообразование в дополнение к повторяемости результатов.

Hermann и др. (4) разработали бессывороточное обогащение среды для культуры Corynebacterium diphtheriae чтобы преодолеть слабую повторяемость, с которой сталкиваются при использовании для обогащения сыворотку лошади, овцы или кролика.

Эта бессывороточная обогатительная добавка состоит из кислотного гидролизата казеина, твина 80 и глицерина (5). В процессе инкубации токсинообразующих штаммов появляется линия преципитации.

Протеозный пептон обеспечивает азот и углерод, требуемые для хорошего роста большого разнообразия микроорганизмов, а также для токсинообразования. Хлорид натрия поддерживает осмотическое давление питательной среды. Агар включен как отверждающий агент. Теллурит калия ингибирует большинство грамотрицательных бактерий кроме Corynebacterium, Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius и Enterococci.

Staphylococcus epidermidis может показать рост. Возможны также ложноположительные результаты. Поэтому необходимо всегда проводить параллельно позитивный контроль (6).

Corynebacterium ulcerans и Corynebacterium pseudotuberculosis могут также образовывать линию преципитации (7).

Контроль качества

Внешний вид порошка:

Кремово-желтый гомогенный сыпучий порошок

Консистенция готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

В чашках Петри формируется янтарного цвета гель, прозрачный, с легкой опалесценцией.

Кислотность среды:

При 25°C водный раствор (3,75% вес/об) имеет рН7.8±0.2

pH готовой среды: 7.60-8.00

Культуральные свойства референс-штаммов при 35-37°C через 24-72 часа при добавлении

Питательной Добавки для определения токсигенности дифтерийных бактерий KL (FD072) и

0,5 мл 1%-го раствора Теллурита калия (FD052).

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	инокулюм (КОЕ)	рост	выросло колоний	линия преципитации
Bacillus subtilis 6633	>=10³	подавлен	0%
Corynebacterium diphtheriae type gravis	50-100	обильный	>=50%	положительно
Corynebacterium diphtheriae type intermedius	50-100	обильны	>=50%	положительно
Corynebacterium diphtheriae type mitis	50-100	обильный	>=50%	положительно
Staphylococcus epidermidis12228	50-100	отсутствует-бедный	<= 10 %	отрицательно
Интерпретация рост культуры как обильный, хороший, слабый, скудный или отсутствие роста, выраженный в % выросших колоний по отношение к количеству засеянных микроорганизмов: Рост культуры (посевная доза 10 2-10 3 КОЕ/мл):   % от засеянных Обильный: >70 %; Хороший: > 40 % но <70 %; Плохой: > 20 % но <40 %; Скудный – слабый: > 10 % но <20 %; Скудный: > 10 %; Нет роста: нет видимых колоний

Условия и сроки хранения:

Сохранять при температуре ниже +30ºС в плотно закрытом контейнере. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2-8ºС.

Источники литературы:

1. Collee J. G., Fraser A. G., Marmion B. P., Simmons A., (Eds.), Mackie and McCartney, Practical Medical Microbiology, 1996, 14th Edition, Churchill Livingstone

2. Elek S. D., 1948, Br. Med. J., 1:493.

3. King E. O., Frobisher M. and Parsons E. I., 1949, Am. J. Public Heal th, 39:1314.

4. Hermann G. J., Moore M. S., and Parsons E. I., 1958, Am. J. Clin. Pathol., 29:181.

5. MacFaddin J. F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Identification-Maintenance of Medical Bacteria. Vol. I, Williams and Wilkins, Baltimore.

6. Murray P. R., Baron E. J., Jorgensen J. H., Pfaller M. A., Yolken R. H., (Eds.), 8th Ed., 2003, Manual of Clinical Microbiology, ASM, Washington, D.C.

7. Branson, 1972, Methods in Clinical Bacteriology, Charles C. Thomas,Springfield, III