HiMedia: инструкция по применению продукции По всем вопросам обращаться: Почтовый адрес: 123007, Москва, а/я 27. Офис: 123007, Москва, Хорошевское шоссе, д. 13 а, кор.3. Тел/Факс: +7 (495) 940 33 12, 940 33 13, 940 33 14,940 33 96, 940 33 97, 940 33 98. E-mail: himedia@himedialabs.ru Наш сайт: www.himedialabs.ru
B12 Culture Agar (Lactobacillus leichmannii Maintenance Medium) Агар для изучения витамина B12. Продукция зарегистрирована в Министерстве здравоохранения Российской Федерации (ФСЗ 2009/03707).		Кат. № M035

 

Применение:

Среда рекомендуется для культивирования и поддержания микроорганизмов штамма ATCC 7830, используемого в качестве эталонного для изучения витамина В12.

 

Ингредиенты	грамм/литр
Пептический перевар животной ткани	7,50
Дрожжевой экстракт	7,50
Глюкоза	10,00
Калия дигидрофосфат	2,00
Томатный сок (из 100 мл)	5,00
Твин-80 (полисорбат-80)	0,10
Агар-агар	10,00

Конечное значение рН (при 25ºС) 6,8 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

 

Приготовление:

Размешать 42,1 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить по 10 мл в пробирки и стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121ºС) в течение 15 мин. Быстро остудить пробирки в вертикальном положении, не допуская изменения цвета (вследствие перегревания среды).

 

Принцип и оценка результата:

Агар для изучения витамина B12 рекомендуется USP для культивирования и обслуживания Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 (Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis ATCC 7830), который используется в качестве тест-бактерии во время микробиологической оценки витамина B12 (1). У разновидностей Lactobacillus есть очень обременительная пищевая потребность в аминокислотах и витаминах. Эта особенность ограничивает Lactobacillus, чтобы по своим культуральным свойствам конкурировать в окружающей среде. Разновидности Lactobacillus плохо растут на неселективной среде.

Kulp (2), исследуя влияния томатного сока на развитии бактерий нашел, что рост Lactobacillus, acidophilus был увеличен добавлением в среду томатного сока, , о чем так же ранее сообщили Mickle и Breed (3).

Пептический перевар животной ткани служит источником азота и аминокислот.

Дрожжевой экстракт - источник витаминов. Томатный сок добавлен, чтобы создать надлежащую кислую среду. Декстроза - углеродный источник. Полисорбат 80 - эмульгатор. Фосфат калия обеспечивает буферную емкость.

Культуры Lactobacillus leichmannii ATCC 7830 готовят инокуляцией уколом в 3 или больше пробирок. Эту культуру пересевают уколом по крайней мере 3 раза за неделю.

Не используйте культуру для испытания, если ей более чем 4 дня. Перед использованием новой культуры для испытания сделайте по крайней мере 10 последовательных пересевов культуры в период 15 дней. Инкубируйте культуру в течение 16-24 часов при 35+0,5°C.

После инкубации, храните при 2-8°C.

Контроль качества

Внешний вид порошка:

Кремово-желтый гомогенный сыпучий порошок.

 

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,0%-ному агаровому гелю..

 

Цвет и прозрачность готовой среды:

В чашках Петри гель янтарного цвета, прозрачный, с легкой опалесценцией.

 

Кислотность среды:

При 25ºС водный раствор (4,21% вес/об) имеет рН 6,8 ± 0,2.

 

рН готовой среды 6,60-7,00

 

Культуральные свойства:

Культуральные свойства референс-штаммов через 16-24 ч при 35-37ºС.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	инокулюм (КОЕ)	рост
Lactobacillus leichmannii 7830	50-100	хороший -обильный
Интерпретация рост культуры как обильный, хороший, слабый, скудный или отсутствие роста, выраженный в % выросших колоний по отношение к количеству засеянных микроорганизмов: Рост культуры (посевная доза 10 2-10 3 КОЕ/мл):   % от засеянных Обильный: >70 %; Хороший: > 40 % но <70 %; Плохой: > 20 % но <40 %; Скудный – слабый: > 10 % но <20%; Скудный: > 10 %; Нет роста: нет видимых колоний

 

Условия и сроки хранения:

Сохранять при температуре ниже +30ºС в плотно закрытом контейнере. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2-8ºС.

Источники литературы:

1. The United States Pharmacopoeia, 2006, USP 29/ NF 24, The United States Pharmacopoeial Covention, Rockville, MD.
2. Kulp and White, 1932, Science 76:17.
3. Mickle and Breed, 1925, Technical Bulletin 110, NY State Agriculture Ex. station, Geneva, N.Y.R