 |
 |
|||||
|
|
|
Всего посетителей: 3836722
|
|
 
|
Среда для микробиологического испытания фолиевой кислоты
Применение: Эта среда рекомендуется для микробиологического исследования по определению фолиевой кислоты с использованием в качестве тест-микроорганизма штамма Streptococcus faecium АТСС 8043 (ранее известного, как Streptococcus faecalis АТСС 8043).
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Размешать 11,1 г порошка в 100 мл дистиллированной воды. Прокипятить в течение 2-3 мин для полного растворения частиц. Тщательно перемешать для равномерного распределения легкого преципитата. Для исследования внести по 5 мл среды в пробирки, содержащие возрастающие количества стандарта или испытуемого препарата, и довести общий объем дистиллированной водой до 10 мл. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121ºС) в течение 5 мин.
Принцип и оценка результата: Среда для количественного определения Фолиевой кислоты содержит все необходимые питательные вещества для роста испытательного микроорганизма кроме фолиевой кислоты. Питательная среда содержит аминокислоты, углеводы, пурин, пиримидины, соли и витамины. Фолиевая кислота требуется для роста Enterococcus hirae. Следовательно, рост этого микроорганизма произойдет, только если анализируемый образец содержит фолиевую кислоту. Точная концентрация фолиевой кислоты в контрольной пробе может быть определена путем сравнения роста, полученного к известной стандартной концентрации фолиевой кислоты (по калибровочной кривой). Среда для количественного определения Фолиевой кислоты приготовлена согласно составу, описанному Capps и др. (1), и рекомендуется AOAC (2) для определения содержания фолиевой кислоты фармацевтических продуктов и других материалов с помощью Enterococcus hirae ATCC 8043 в качестве испытательного микроорганизма. Ссылка на стандарт пробы на фолиевую кислоту (2). Способ приготовления: Основные штаммы Enterococcus hirae ATCC 8043 готовятся инокуляцией уколом на Агар для Лактобактерий AOAC (M366), инкубация при 35-37°C в течение 24 часов, Далее пробирки сохраняются в холодильнике. Пересевы выполняются с ежемесячно. Инокулят для пробы готовят путем пересева из основного штамма Enterococcus hirae ATCC 8043 в пробирку, содержащую 10 мл Бульона для лактобактерий AOAC (M367). После инкубации в течение24 часов при 35-37°C клетки осаждают центрифугированием в асептических условиях, а жидкость удаляют. Клетки повторно суспендируют в 10 мл стерильного изотонического раствора NaCl. Суспензия клеток затем разбавляется 1:100 стерильным изотоническим раствором NaCl. Одна капля этой более поздней суспензии используется для инокуляции каждой из пробирок пробы. Необходимо калибровочную кривую строить для каждой отдельной пробы начиная с условий автоклавирования, температуры инкубации, и т.д., которые влияют на показания калибровочной кривой, не может дублироваться точно время от времени. Калибровочная кривая должна быть получена при помощи фолиевой кислоты на уровнях 0, 2, 4, 6, 8 и 10 нг на пробирку пробы (10 мл). Пробирки охлаждоются в течение 15-30 минут для остановки роста перед чтением. Турбидиметрический показатели должны быть прочитаны после инкубации 16-18 часов при 35-37°C, ацидиметрические - после 72 часов при 35-37°C. Для приготовления основного раствора фолиевой кислоты используйте 20 мг фолиевой кислоты. Приготовление концентраций фолиевой кислоты: Растворите 20 мг сухой фолиевой кислоты в 100 мл дистиллированной воды, содержащих 20 мл этанола. Доведите pH раствора до 10,0 0,1Н раствором NaOH, чтобы растворить кислоту, а затем доведите pH до 7,0 0,05 Н раствором HCl. Этот раствор содержит 200 мкг фолиевой кислоты в 1мл. Разбавьте 1 мл этого раствора 999,0 мл дистиллированной воды для получения 200 нг в 1мл, и наконец, для растворения 1 мл этого раствора с 999 мл Буфера Фолиевой кислоты (M544) для получения титрованного раствора, содержащего 0,2 нг фолиевой кислоты на 1мл, используйте 0.0, 0.5, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0 и 5,0 мл на пробирку пробы. Нужно соблюдать экстремальную заботу для предотвращения загрязнения среды или стеклянной посуды, используемой для пробы. Должна использоваться чистая стеклянная посуда свободная от детергентов. Даже небольшое количество загрязнения инородным веществом может привести к ошибочным результатам.
Контроль качества Внешний вид порошка: Кремово-желтый гомогенный сыпучий порошок
Цвет и прозрачность готовой среды: Светло-янтарного цвета прозрачный раствор, с незначительным преципитатом.
Кислотность среды: При 25°C водный раствор (11,1% вес/об) имеет рН6.7±0.2
pH готовой среды: 6.50-6.90
Культуральные свойства: Постепенное увеличение роста с увеличением стандартной концентрации Фолиевой кислоты 0,2,4,6,8,10 нг на пробирку пробы зарегистрировано как эквивалентное увеличение спектральной поглощательной способности при длине волны 620 нм
Культуральные свойства: Микробиологическая проба на Фолиевую кислоту выполнена с помощью Enterococcus hirae ATCC 8043 согласно AOAC. После инкубации при 35-37°C в течение 18-24 часов получен хороший рост.
Условия и сроки хранения Магазин между 2-8°C в плотно закрытой посуде и использованием недавно приготовил питательную среду. Используйте перед датой окончания срока действия на метке.
Условия и сроки хранения: Сохранять при температуре +2-8ºС в плотно закрытом контейнере. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2-8ºС.
Источники литературы:
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
