M-Endo Agar LES
М-Агар Эндо
M1106

 

Эту среду используют для подсчета колиформных бактерий в воде двухэтапным мембранным методом.

 

Метод мембранных фильтров.
Рост на среде M-Endo Agar LES (M1106)
Escherichia coli

 

  

Состав**:

Ингредиенты
грамм /литр
Гидролизат казеина
3,70
Пептический перевар животной ткани
3,70
Триптоза
7,50
Дрожжевой экстракт
1,20
Лактоза
9,40
Калия гидрофосфат
3,30
Калия дигидрофосфат
1,00
Натрия хлорид
3,70
Натрия дезоксихолат
0,10
Натрия лаурилсульфат
0,05
Натрия сульфит
1,60
Фуксин основной
0,80
Агар-агар
15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,2 ± 0,2
 

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 51,0 г порошка в 980 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ СРЕДУ. Остудить до 45°С и асептично добавить 20 мл 95%-ного этанола. Перемешать и разлить по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм. При использовании больших чашек наливать такое количестве среды, чтобы образовался слой толщиной 1,5 мм. НЕ ДЕРЖАТЬ ЧАШКИ СО СРЕДОЙ НА СВЕТУ.

Предупреждение: основной фуксин является потенциальным канцерогеном, поэтому при обращении с ним следует избегать вдыхания порошка и попадания его на кожу.

Принцип и оценка результата:

Эта среда дана в прописи McCarthy, Delaney и Grasso (1) и используется для подсчета колиформных бактерий в воде (2).Метод мембранных фильтров для подсчета колиформных бактерий более достоверен и ценен, по сравнению с методом бродильных проб. Указанные выше авторы предложили использовать двухэтапный метод обогащения для уменьшения токсического воздействия окружающей среды на колиформные бактерии и повышения их выживания. Пропись данной среды основана на прописи Эндо, предложенной для дифференциации бактерий по способности ферментировать лактозу (3).

Гидролизат казеина, триптоза, пептический перевар животной ткани и дрожжевой экстракт служат источником необходимых питательных веществ (особенно, азотистых) для роста колиформных бактерий. Лактоза является ферментируемым субстратом. Натрия дезоксихолат, сульфит натрия и основной фуксин подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Фосфаты придают среде буферные свойства. Колиформные бактерии ферментируют лактозу, формируют красные колонии и окрашивают в тот же цвет среду вокруг них. Микроорганизмы, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии.

На первом этапе обогащения подложку смачивают Лаурил-триптозным бульоном (М080). Мембранный фильтр, через который пропущена исследуемая вода, асептично накладывают на подложку и без переворачивания инкубируют 2 ч при 35°С во влажной камере. Затем фильтр асептично переносят на М-Агар Эндо в чашке и инкубируют при той же температуре в течение 24 ч. В другом варианте подложку для мембранного фильтра помещают на внутреннюю поверхность крышки чашки с М-Агаром Эндо, смачивают 2 мл Лаурил-трпитозного бульона (М080) и инкубируют 1-1,5 ч при 35°С. На втором этапе подготовленный фильтр перекладывают прямо на поверхность агара и инкубируют, как описано выше. Через 24 инкубирования предположительно колиформные бактерии формируют золотисто-зеленые колонии с металлическим блеском.

Определение концентрации колиформных бактерий: отмечают общее количество колиформных бактерий на 100 мл исследуемой воды. При обнаружении на фильтре 20-80 колоний (но не более 200) можно экстраполировать результат исследования по следующей формуле.

Количество колиформных в 100 мл = кол-во колоний колиформ х 100 : кол-во профильтрованной воды.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий розовый порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет красную окраску, слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (5,1% вес/об с 2% об/об этанола) имеет рН 7,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 20-24 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Рост
Цвет колоний
Enterobacter aerogenes (13048)
Обильный
Красные или черные с блеском
Escherichia coli (25922)
Обильный
Красные или черные с блеском
Salmonella typhi (6539)
Обильный
Бесцветные
Staphylococcus aureus (25923)
Подавляется

Ссылки:

1. McCarthy J.A., Delaney J.E. and Grasso R., 1961, Water and Sewage Works, 108:238.
2. American Public Health Association, 1980, Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 15th ed., APHA, Inc., Washington, D.C.
3. Endo, 1904, Zentrabl. Bakteriol. Abt. I. Orig., 35:109.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить не рекомендуется.