 |
 |
|||||
|
|
|
Всего посетителей: 3836587
|
|
 
|
М-Агар Эндо
Эту среду используют для подсчета колиформных бактерий в воде двухэтапным мембранным методом.
Состав**:
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам Приготовление:Размешать 51,0 г порошка в 980 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. НЕ АВТОКЛАВИРОВАТЬ СРЕДУ. Остудить до 45°С и асептично добавить 20 мл 95%-ного этанола. Перемешать и разлить по 4 мл в чашки Петри диаметром 60 мм. При использовании больших чашек наливать такое количестве среды, чтобы образовался слой толщиной 1,5 мм. НЕ ДЕРЖАТЬ ЧАШКИ СО СРЕДОЙ НА СВЕТУ. Предупреждение: основной фуксин является потенциальным канцерогеном, поэтому при обращении с ним следует избегать вдыхания порошка и попадания его на кожу. Принцип и оценка результата:Эта среда дана в прописи McCarthy, Delaney и Grasso (1) и используется для подсчета колиформных бактерий в воде (2).Метод мембранных фильтров для подсчета колиформных бактерий более достоверен и ценен, по сравнению с методом бродильных проб. Указанные выше авторы предложили использовать двухэтапный метод обогащения для уменьшения токсического воздействия окружающей среды на колиформные бактерии и повышения их выживания. Пропись данной среды основана на прописи Эндо, предложенной для дифференциации бактерий по способности ферментировать лактозу (3). Гидролизат казеина, триптоза, пептический перевар животной ткани и дрожжевой экстракт служат источником необходимых питательных веществ (особенно, азотистых) для роста колиформных бактерий. Лактоза является ферментируемым субстратом. Натрия дезоксихолат, сульфит натрия и основной фуксин подавляют рост грамположительных микроорганизмов. Фосфаты придают среде буферные свойства. Колиформные бактерии ферментируют лактозу, формируют красные колонии и окрашивают в тот же цвет среду вокруг них. Микроорганизмы, не ферментирующие лактозу, образуют бесцветные колонии. На первом этапе обогащения подложку смачивают Лаурил-триптозным бульоном (М080). Мембранный фильтр, через который пропущена исследуемая вода, асептично накладывают на подложку и без переворачивания инкубируют 2 ч при 35°С во влажной камере. Затем фильтр асептично переносят на М-Агар Эндо в чашке и инкубируют при той же температуре в течение 24 ч. В другом варианте подложку для мембранного фильтра помещают на внутреннюю поверхность крышки чашки с М-Агаром Эндо, смачивают 2 мл Лаурил-трпитозного бульона (М080) и инкубируют 1-1,5 ч при 35°С. На втором этапе подготовленный фильтр перекладывают прямо на поверхность агара и инкубируют, как описано выше. Через 24 инкубирования предположительно колиформные бактерии формируют золотисто-зеленые колонии с металлическим блеском. Определение концентрации колиформных бактерий: отмечают общее количество колиформных бактерий на 100 мл исследуемой воды. При обнаружении на фильтре 20-80 колоний (но не более 200) можно экстраполировать результат исследования по следующей формуле. Количество колиформных в 100 мл = кол-во колоний колиформ х 100 : кол-во профильтрованной воды. Контроль качества:Внешний вид порошка:Гомогенный сыпучий розовый порошок. Плотность готовой среды:Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю. Цвет и прозрачность готовой среды:Среда имеет красную окраску, слегка опалесцирует, если в чашках Петри формируется гель. Кислотность среды:При 25°С водный раствор (5,1% вес/об с 2% об/об этанола) имеет рН 7,2 ± 0,2. Культуральные свойства:Ростовые характеристики референс-штаммов через 20-24 ч при 35°С.
Ссылки:1. McCarthy J.A., Delaney J.E. and Grasso R., 1961, Water and Sewage Works, 108:238. Условия и сроки хранения:Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить не рекомендуется.
|
