Loeffler Medium Base Основа среды Леффлера

M537

 

Эту среду с добавлением лошадиной сыворотки используют для культивирования Corynebacterium diphtheriae из клинического материала и пересевов чистых культур этих микроорганизмов.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Пептон специальный	2,50
Мясной экстракт	2,50
Натрия хлорид	1,25
Глюкоза	2,50
Конечное значение рН (при 25°С) 7,3 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 8,8 г порошка в 250 мл дистиллированной воды до полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 0,7 атм (115°С) в течение 20 мин. Остудить до 50-55°С и асептично добавить 750 мл стерильной лошадиной сыворотки (RM1239). Тщательно перемешать и асептично разлить в стерильные пробирки. Стерилизовать в свертывателе дробно не менее 3 дней подряд по 2 часа при 80-85° или текучим паром.

Принцип и оценка результата:

Эта среда первоначально была разработана Loeffler (1). Дальнейшие модификации вносили Perry и Petran (2) и Buck (3). Среда Леффлера улучшает первичную и вторичную выделяемость прихотливых микроорганизмов, особенно из носового и глоточного секрета. Кроме того, на ней восстанавливаются вирулентные и другие дифференциальные свойства (морфологические, культуральные), утраченные при длительном субкультивировании.

Высокая концентрация сыворотки помогает определить протеолитическую активность микроорганизмов, а также пигментообразование и способность к образованию аскоспор. Пептон и мясной экстракт обеспечивают микроорганизмы важнейшими питательными веществами. Глюкоза является ферментируемым субстратом и источником энергии.

Засевают материал тампоном, непосредственно растирая его по поверхности среды. После инкубирования готовят мазки со скошенной поверхности. Для определения протеолитической активности засевают скос и перед инкубированием заливают его Тиогликолевой средой по Бреверу (М019). Посевы выдерживают 3-4 дня и более до появления признаков протеолиза. Для селективного выделения коринебактерий Среду Леффлера рекомендуется использовать параллельно с Сывороточно-теллуритовым агаром (4).

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий желтый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Основа среды имеет светло-янтарную окраску, прозрачна. После добавления сыворотки и ее коагуляции в пробирках образуются опалесцирующие косячки.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (3,52% вес/об) имеет рН 7,3 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов в течение 3-4 дней при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост
Corynebacterium diphtheriae (11913)	Хороший или средний
Pseudomonas aeruginosa (10145)	Хороший (зеленые колонии, протеолиз)
Staphylococcus aureus (25923)	Хороший (желтые или золотистые колонии)

Ссылки:

1. Loeffler, 1887, Zentralbl. Bakteriol. Parasitenkd., 2:105.
2. Perry and Petran, 1939, J. Lab. Clin. Med., 25:71.
3. Buck, 1949, J. Lab. Clin. Med., 34:582.
4. MacFaddin J. F., 1985, Media for Isolation-Cultivation-Maintenance of Medical Bacteria, Vol. I, Williams and Wilkins, Baltimore.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.