SD239 Kit II for ESBL identification, Cefepime Набор для обнаружения бета-лактамаз расширенного спектра, цефепим, (1набор) (ФСЗ 2012/12473)

 

Назначение

Набор предназначен для идентификации продуцентов бета-лактамаз расширенного спектра.

 

Состав набора

Набор содержит 3 картриджа с цефепимом 30 мкг/диск (код SD219) и 3 картриджа с цефепимом и клавулановой кислотой 30/10 мкг/диск (код SD234). В каждом картридже 50 дисков.

 

Процедура определения чувствительности

1. Приготовьте чашки с агаром Мюллера-Хинтона (M173) для работы с быстро растущими аэробами по методу Бауэра-Керби. Среда в чашках должна быть стерильной и иметь глубину 4 мм.
2. В качестве посевного материала используйте чистые культуры. Отберите 3-4 похожих колонии и поместите их в 5 мл подходящего бульона, такого как, например, Триптон Соевый бульон (М011). Инкубируйте 2-8 ч при температуре 35⁰С до возникновения видимой мутности. Доведите суспензию до концентрации клеток 10⁵-10⁶ клеток/мл (оптическая плотность 0.08-0.11 на длине волны 620 нм).
3. Опустите стерильный хлопковый тампон в приготовленную суспензию. Удалите избыток жидкости с тампона путем прокручивания тампона, прижатого к стенкам пробирки выше уровня жидкости. Засейте культуру штрихообразным движением по всей поверхности агара трижды, каждый раз после аппликации поворачивая чашку вокруг своей оси на 60⁰. Подсушите посевы 5-15 минут при комнатной температуре в чашках с закрытыми крышками.
4. Асептично нанесите диски на поверхность чашки. Расстояние между центрами дисков должно быть не менее 30 мм.
5. Поместите чашки с посевами крышками вниз в термостат на 35-37⁰С и инкубируйте 14-19 часов или более (при необходимости).
6. Измерьте диаметр зон торможения роста.

 

Интерпретация результатов

Бета-лактамазы расширенного спектра (БЛРС) повышают устойчивость к расширенному спектру цефлоспоринов третьего поколения (например, к цефтазидиму, цефотаксиму и цефтриаксону) и монобактамам (например, к азтреонаму). Они не влияют на устойчивость к цефамицинам (цефокситин и цефотетан) или к карбапенемам (меропенем, имипенем).

Присутствие БЛРС-продуцирующего микроорганизма в очаге инфекции может привести к отсутствию терапевтического эффекта при использовании вышеуказанных антибиотиков. Зачастую БЛРС трудно обнаружить, поскольку они имеют различные уровни активности против различных цефалоспоринов.

Таким образом, выбор антимикробного агента для лечения является критичным. Если обнаружены БЛРС, то все пенициллины, цефалоспорины и азтреонам неприменимы в качестве лечебных средств, даже в том случае, когда тесты in vitro указывают на чувствительность к этим препаратам.

Для некоторых антимикробных агентов CLSI (Институт по клиническим лабораторным стандартам) разработал скрининг-тесты, базирующиеся на диско-диффузионном методе (1). Штаммы Klebsiella spp. и Escherichia coli, продуцирующие БЛРС, могут быть клинически устойчивы к терапии пенициллинами, цефалоспоринами и азтреонамом, несмотря на чувствительность in vitro к этим агентам. Some of these strains will show zone of inhibition below the normal susceptible population, but above the standard breakpoints for certain extended spectrum cephalosporins or Aztreonam.

Чувствительность скрининга на БЛРС у кишечных бактерий может варьировать в зависимости от тестируемого антимикробного агента. Использование при скрининге более чем одного антимикробного агента повышает чувствительность обнаружения БЛРС.

CLSI рекомендует фенотипически подтверждать потенциальные БЛРС-продуцирующие изоляты K.pneumoniae, K.oxytoca или E.coli тестированием с применением цефотаксима  и цефтазидима, как отдельно, так и в комбинации с клавулановой кислотой (1). Тестирование может быть проведено как методом микроразведений в бульоне, так и диско-диффузионным методом. В последнем случае необходимо использовать для контроля качества БЛРС тестов штаммы K.pneumoniae ATCC 700603 и E.coli ATCC 25922 (1).

Если в рекомендованном CLSI тесте фенотипического подтверждения выделенный изолят оказался продуцентом БЛРС, то его считают устойчивым ко всем пенициллинам, цефалоспоринам и азтреонаму. Цефамицины (цефотетан и цефокситин) в этот список не включают. If an isolate is not confirmed as an ESBL-producer, current recommendations suggest reporting results as for routine testing. Do not change interpretations of penicillins, cephalosporins, and Aztreonam for isolates not confirmed as ESBLs.

Другие изоляты Enterobacteriaceae, такие как Salmonella spp. и P.mirabilis, и изоляты P.aeruginosa продуцируют БЛРС. Тем не менее скрининг P.mirabilis на продукцию БЛРС рекомендован только в клинически обоснованных случаях (например, выделенные при бактериемии изоляты). Решение о целесообразности проведения скрининга на БЛРС для изолятов из мочи должно быть принято на институциональной основе, принимая во внимание вопросы распространения, терапии и контроля инфекции.

 

Контроль качества

Средний диаметр зон торможения роста, наблюдаемый на агаре Мюллера-Хинтона (M173), через 18 часов культивирования тест-культур при 35-37⁰С. 

Организм (ATCC)	Диаметр зон торможения, мм
E.coli (25922) с SD219	31-37*
E.coli (25922) с SD234	32-40
K.pneumoniae (700603) с SD219	16-22*
K.pneumoniae (700603) с SD234	> 27
* - согласно стандарту CLSI

 

Литература:  Performance standards of Antimicrobial Disc Susceptibility Tests, CLSI Vol. 31 No. 1, Jan 2012/

Хранение: Хранить при температуре от -20⁰С до +8⁰С. Использовать до указанного на этикетке срока годности.