Lysine Iron Cystine Broth Лизин-цистиновый железосодержащий бульон

M845

 

Эту среду используют для быстрого предварительного определения сальмонелл в пищевых продуктах, их ингредиентах и кормах.

Состав**:

Ингредиенты	грамм/литр
Гидролизат казеина	5,00
Дрожжевой экстракт	3,00
L-Лизина гидрохлорид	10,00
Маннит	5,00
Глюкоза	1,00
Салицин	1,00
L-Цистин	0,10
Железа аммонийного цитрат	0,50
Натрия тиосульфат	0,10
Нейтральный красный	0,025
Конечное значение рН (при 25°С) 6,2 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 25,7 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить до комнатной температуры и асептично добавить разведенное в воде содержимое 1 пузырька с селективной (новобиоцин) добавкой (FD101). Тщательно перемешать и разлить в стерильные пробирки.

Принцип и оценка результата:

Эта среда является модификацией прописи, предложенной Hober, Aston и Peterson (1), которые показали полезность такой среды для определения в течение 3 дней сальмонелл в пищевых продуктах и их ингредиентах.

Гидролизат казеина и L-Цистин служат источником необходимых питательных веществ для роста бактерий, а дрожжевой экстракт – источником витаминов группы В. Глюкоза, маннит и салицин являются ферментируемыми субстратами. Цитрат аммонийного железа и тиосульфат натрия являются индикатором образования сероводорода. Лизин служит субстратом для декарбоксилирования или дезаминирования.

Навеску исследуемого материала (25 г) вносят в Лактозный бульон (М026), размешивают и инкубируют при 35±2°С в течение 24 ч, затем 1 мл культуры вносят в 10 мл Тетратионатного бульона (М032) и инкубируют при той же температуре 24 ч. Вторичную культуру в объеме 1 мл засевают в 10 мл Лизин-цистинового железосодержащего бульона с новобиоцином и инкубируют при указанной температуре 24 ч. Для исключения ложноотрицательного результата в случае сероводородотрицательных сальмонелл пробирки дополнительно инкубируют в течение 16-24 ч. Затем в каждую пробирку добавляют по 0,1 мл 0,3%-ного раствора бромтимолового синего в 0,1N растворе гидроксида натрия и 50%-ном этаноле. Если цвет среды меняется с желтого на темно-зеленый или синий, это указывает на щелочную реакцию и, следовательно, присутствие сальмонелл.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-розовый порошок.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Среда имеет красноватую окраску, прозрачна, может иметь небольшие частицы.

Кислотность среды:

При 25°С водный раствор (2,57% вес/об) имеет рН 6,2 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 35°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Цвет среды	Цвет после внесения индикатора	Н2S
Salmonella typhi (19430)	Обильный	Желтый	Темно-зеленый или синий	+
Salmonella enteritidis (13076)	Обильный	Желтый	Темно-зеленый или синий	+
Escherichia coli (25922)	Подавляется	Красный	Красный или синий	–
Shigella flexneri (12022)	Подавляется	Красный	Красный или синий	–

Ссылки:

1. Hoben, Ashton and Peterson, 1973, Applied Microbiol., 25:123.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.