Kligler Iron Agar / Modified Агар Клиглера (модифицированный)

M078I / М078A

 

Эти среды рекомендуют для дифференциации грамотрицательных бактерий кишечного происхождения по их способности ферментировать глюкозу и лактозу, а также продуцировать сероводород.

Состав**:

Ингредиенты	М078I грамм/литр	М070А грамм/литр
Мясной экстракт	3,00	3,00
Дрожжевой экстракт	3,00	3,00
Гидролизат казеина	20,00	20,00
Натрия хлорид	5,00	5,00
Лактоза	10,00	10,00
Глюкоза безводная	1,00	1,00
Железа аммонийного цитрат (х 6Н2О)	0,50	–
Железа сульфат	–	0,20
Натрия тиосульфат (х 5Н2О)	0,50	0,30
Феноловый красный	0,025	0,025
Агар-агар	15,00	15,00
Конечное значение рН (при 25°С) 7,4 ± 0,2

** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам

Приготовление:

Размешать 57,7 г порошка М078I или 57,3 г порошка М078А в 1000 мл дистиллированной воды. Прокипятить для полного растворения частиц. Разлить в пробирки. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин. Остудить пробирки в таком положении, чтобы получить скошенную часть и столбик высотой 2,5 см. Наилучшие результаты получают на свежеприготовленной среде.

Принцип и оценка результата:

Эти среды являются модификациями агар Клиглера (1). Международным комитетом (ISO) среда М078I рекомендована для предварительной идентификации Yersinia enterocolitica (2), а среда М078А – псевдомонад (3).

Гидролизат казеина и мясные пептоны служат источником важнейших питательных веществ, а дрожжевой экстракт – витаминов группы В. Лактоза и глюкоза – ферментируемые субстраты, продукты разложения которых могут изменять цвет индикатора рН фенолового красного.

Тиосульфат натрия и сульфат железа усиливают образование сероводорода, который выявляют по развитию почернения всего столбика или формированию черного кольца у верхушки столбика. Образование газа определяют по появлению пузырьков и разрывов среды. О ферментации глюкозы свидетельствует желтый столбик, лактозы – желтый скос. На агар Клиглера для предварительной идентификации засевают также чистые культуры с чашечных сред, например, Агара МакКонки (М082), Висмут-сульфитного агара (М027) или Дезоксихолат-цитратного агара (М065), Агара Сальмонелла-Шигелла (М108) или др. Для посева в глубину среды рекомендуется использовать прямую проволоку, чтобы не вызвать разрывов среды при посеве петлей.

Контроль качества:

Внешний вид порошка:

Гомогенный сыпучий светло-красный порошок.

Плотность готовой среды:

Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.

Цвет и прозрачность готовой среды:

Готовая среда имеет красную окраску, прозрачна или слегка опалесцирует, если в пробирках формируется скошенный столбик геля.

Кислотность среды:

При 25°С водные растворы М078I (5,77% вес/об) и М078А (5,73% вес/об) имеют рН 7,4 ± 0,2.

Культуральные свойства:

Ростовые характеристики референс-штаммов через 24-48 ч при 37°С.

Штаммы микроорганизмов (АТСС)	Рост	Скос	Столбик	Газ	Сероводород
Escherichia coli (25922)	Обильный	К	К	+	–
Enterobacter aerogenes (13047)	Обильный	К	К	+	–
Proteus vulgaris (13315)	Обильный	Щ	К	–	+
Salmonella typhi (6539)	Обильный	Щ	К	–	+
Salmonella enteritidis (13076)	Обильный	Щ	К	+	+
Klebsiella pneumoniae (13883)	Обильный	К	К	+	–
Shigella flexneri (12022)	Обильный	Щ	К	–	–
Pseudomonas aeruginosa (27853)	Обильный	Щ	Щ	–	–
Yersinia enterocolitica (27729)	Обильный	Щ	К	V	–

Примечание:
К - образование кислоты (желтый цвет);
Щ - образование щелочи (красный цвет);
"+" - положительная реакция (почернение);
V - вариабельная реакция.

Ссылки:

1. Kligler I.J., 1918, J. Exp. Med., 28:319.
2. International Organization For Standardization (ISO), 1994, Draft ISO/DIS 10273.
3. International Organization For Standardization (ISO), 1995, Draft ISO/DIS 13720.

Условия и сроки хранения:

Порошок хранить при температуре ниже +25°С. Использовать до даты, указанной на этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8°С.